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HiCrome顯色培養(yǎng)基與常規(guī)培養(yǎng)體系分離鑒定泌尿病原體的對比及評價

更新時間:2019-08-28  |  點擊率:1445

說明:本文根據以下文獻編譯

原文:Laila Akter,Rezwana Haque, and Md. Abdus Salam. Comparative evaluation of chromogenic agar medium and conventional culture system for isolation and presumptive identification of uropathogens. Pak J Med Sci. 2014,30(5): 1033–1038.

 

尿液是臨床實驗室常見的培養(yǎng)樣本。本實驗比較了HiCrome-UTI顯色瓊脂(貨號:MV1353,品名:HiCrome UTI HiVeg Agar,HiMedia公司生產)與血瓊脂(BA)麥康凱瓊脂(MAC)的性能,對尿液中的細菌進行分離和初步鑒定。

 

尿路感染是重要的臨床疾病,范圍大量的門診病人和住院病人都與尿路感染有關,尿液成為的培養(yǎng)樣本。

 

尿路感染的病因診斷通常需要在標準瓊脂培養(yǎng)基上進行定量的培養(yǎng),尿樣本中只有20%到30%的細菌會顯著生長主要的致病因子是大腸桿菌、克雷伯氏菌屬、單胞菌屬、變形桿菌屬、腸球菌屬和葡萄球菌屬

 

傳統(tǒng)培養(yǎng)基,血瓊脂(BA)和MAC瓊脂常被一起使用,以增加實驗的準確性。

 

血瓊脂作為一種濃縮培養(yǎng)基,可以支持大多數泌尿病原體的生長,但其在細菌鑒定方面的性能非常差。同樣,在Mac和Cled瓊脂上也可以區(qū)分乳糖發(fā)酵菌和非發(fā)酵,但進一步的物種鑒定需要進一步培養(yǎng)或不同的生化試驗,延長鑒定時間,增加了成本。此外,它們促進病原體生長的能力有限,并不適合作為理想的初級分離方法

 

摘要:

 

試驗方法:對2012年1月12月在孟加拉國拉賈希市伊斯蘭堡醫(yī)學院附屬醫(yī)院集的443例尿本進行培養(yǎng)。將膿細胞≥5/hpf的尿液標本同時接種到血瓊脂(BA)、MAC瓊脂和HiCrome瓊脂(CA)培養(yǎng)基上,并在37℃下進行培養(yǎng)過夜,比較不同培養(yǎng)基的分離率和細菌種類的推測鑒定。

 

試驗結果:共培養(yǎng)出189個(42.67%)陽性平板上的199株細菌,其中單微生物培養(yǎng)179株(40.40%),多微生物培養(yǎng)10株(2.26%)。HiCrome-UTI瓊脂和血瓊脂培養(yǎng)基生長率100%,而MAC瓊脂培養(yǎng)基的生長率為151(75.88%)。作為尿液培養(yǎng)基,HiCrome UTI瓊脂(97.49%)的推定鑒定率明顯高于MAC瓊脂(67.34%)(P<0.001)。在199個分離株中,大腸桿菌是從118個(59.30%)樣本中分離出的主要泌尿系病原體,其在CAMAC和BA上的鑒定率分別為95.76%、93.22%和5.93%。所有10(100%)個多微生物在CA上旺盛生長且肉眼可見,而在每個BA和MAC上只有1(10%)。

 

試驗結論:與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比,HiCrome UTI瓊脂用作尿培養(yǎng)基的分離率和鑒定率較高。它在促進多微生物生長以及易于通過*的菌落顏色快速識別方面的特征的。

 

 

正文:

 

顯色瓊脂(CA)培養(yǎng)基越來越多地被用作一種多用途的原代培養(yǎng)工具,以更好地分離細菌種類并從臨床標本中鑒別。7種生色底物被納入這些培養(yǎng)基中,這些底物被具有特殊功能的細菌酶分解而顯色。這種選擇性培養(yǎng)基不僅支持所有泌尿病原體的生長,而且還可以更容易地診斷混合細菌感染。在一些研究中,將顯色培養(yǎng)基與傳統(tǒng)培養(yǎng)基進行比較,其優(yōu)點包括減少鑒定時間、減少工作量、更容易識別混合生長微生物以及減少細菌鑒定的生化試驗數量。所有這些因素都直接降低成本。

 

HiCrome UTI瓊脂是一種顯色培養(yǎng)基,有助于快速分離和鑒別大多數泌尿病原體,包括混合微生物的各種物種。大腸桿菌菌落常見的泌尿病原體由于其含有β-半乳糖苷酶,裂解顯色底物而呈粉紅色,在該培養(yǎng)基上被明確的鑒定,無需進一步的生化試驗。產生β-葡萄糖苷酶的菌株,如腸球菌和沙雷雷克雷伯氏腸桿菌群,由于葡萄糖苷水解包含在培養(yǎng)基中的顯色底物而形成藍色菌落。同樣地,培養(yǎng)基中的色氨酸可用于檢測變形菌群。變形菌群生產色氨酸脫氨酶,裂解色氨酸后呈現彌漫的棕色。假單胞菌屬產生無色菌落腐生菌產生白色菌落某些后續(xù)的鑒定試驗,如*酶、氧化酶和吲哚試驗,可直接從HiCrome-UTI瓊脂上的菌落中進行,也可以不用傳代到另一種基本培養(yǎng)基上進行抗生素敏感性試驗。

 

方法:

 

樣本收集培養(yǎng)基見前。

 

尿液培養(yǎng):所有尿液樣本均無菌接種到HiCrome UTI瓊脂、血瓊脂和MacConkey瓊脂培養(yǎng)基上,使用28g的校準金屬絲環(huán),內徑3.26 mm,含0.004 ml尿液。平板在37℃有氧培養(yǎng),過夜培養(yǎng)后,通過菌落計數(100個菌落的生長等于105個菌落形成單位(cfu/ml尿),檢查有無明顯的細菌尿癥)。

 

細菌感染的顯著性標準:有癥狀的婦女體內有大于105 cfu/ml的非大腸菌群或大于10cfu/ml的大腸菌群有癥狀的人體內細菌含量大于103cfu/ml。

 

鑒定:根據制造商描述的菌落形態(tài)和顏色,在HiCrome UTI瓊脂上進行細菌生長的鑒定。Mac瓊脂和BA上的菌落也根據每個泌尿病原體的菌落特征進行鑒定。使用標準鑒定方案(如革蘭氏染色、運動試驗、*酶試驗、凝固酶試驗、氧化酶試驗和其他適用于菌株的相關生化試驗)對菌株進行終鑒定。

 

統(tǒng)計分析:所有數據均輸入社會科學統(tǒng)計包(SPSS)16.0版。對分類變量(如細菌類型、分離率、假設鑒定和培養(yǎng)中多微生物生長率)生成了百分比頻率。采用卡方檢驗(x2)計算P值,比較CA和MAC的假定識別率。

 

結果:

 

在443份尿液培養(yǎng)中,189份(42.67%)有明顯的細菌生長,254份(57.33%)無生長。培養(yǎng)陽性標本中,單生長179例(40.41%),兩種菌混合生長10例(2.26%)。118樣本(59.30%)分離出大腸桿菌其次是腐生葡萄球菌38(19.09%)、腸球菌23(11.56%)、克雷伯氏菌11(5.53%)、假單胞菌4(2.01%)、變形桿菌3(1.51%)和腸桿菌2(1.00%)。

 

Hicrome UTI瓊脂和血瓊脂培養(yǎng)基均支持100%細菌生長,而Mac瓊脂培養(yǎng)基中有151例(75.88%)細菌生長。

 

根據原代培養(yǎng)板上的菌落特征對199株細菌進行推測性鑒定,Hicrome UTI瓊脂上可鑒194株(97.49%),Mac瓊脂上可鑒134株(67.34%),BA上可鑒73株(36.68%)。Hicrome UTI瓊脂的推測鑒定率明顯高于作為主要尿培養(yǎng)基的Mac瓊脂。

 

所有10(100%)混合菌群僅在Hicrome-Uti瓊脂培養(yǎng)基上明確鑒定而除大腸桿菌和變形桿菌屬的單一菌屬外,所有其他混合細菌均不能在Mac和血瓊脂培養(yǎng)基上生長及鑒定。

 

尿液中細菌分離鑒定是一項耗時的工作,在使用傳統(tǒng)的培養(yǎng)基如血瓊脂、MAc瓊脂或Cled瓊脂時需要大量的時間。與之相反,Hicrome-UTI瓊脂培養(yǎng)基的分離率較高,對泌尿病原體的鑒定具有統(tǒng)一的鑒定標準,因此比傳統(tǒng)培養(yǎng)基*得多。由于無需下一步的細菌鑒定試驗,顯色培養(yǎng)基大大減少了實驗室工作量,同時具有較高的培養(yǎng)鑒定效率

 

血瓊脂是一種濃縮培養(yǎng)基,Hicrome UTI瓊脂也含有所有必需的營養(yǎng)素,以支持可能的泌尿病原體的生長,這就是為什么所有的分離株都可以在這兩種培養(yǎng)基上生長的原因

 

就細菌的初步鑒定而言,與傳統(tǒng)培養(yǎng)相比,HiCrome UTI瓊脂上鑒定的細菌種類比例明顯較高,可在顯色培養(yǎng)基上觀察每一種細菌*的菌落顏色,特別是針對大腸桿菌、克雷伯氏桿菌、腸球菌和腸桿菌。顯色培養(yǎng)基也能鑒定一些非發(fā)酵乳糖的大腸桿菌,而MAC瓊脂則不行。此外,Hicrome UTI瓊脂還具有限制變形桿菌、克雷伯氏菌和大腸桿菌粘液菌株等分離株擴散生長的優(yōu)點,因此,當存在混合菌群時,顯色培養(yǎng)基能夠更地檢測尿病原體。

 

HiCrome UTI瓊脂較高的分離率特異性識別混合菌群,從而使結果評估更準確。由于BA和MAC瓊脂在菌落分離方面的局限性,其混合菌群的鑒定率非常低。HiCrome UTI瓊脂有助于具體識別尿液樣本中的致病菌,從而減少使用不必要的抗生素。此外,與傳統(tǒng)培養(yǎng)基相比,HiCrome UTI瓊脂費時更少

 

本研究的總體結果表明,與傳統(tǒng)培養(yǎng)體系相比,Hicrome UTI瓊脂提供了一種、省時的方法,能夠可靠地鑒定大多數泌尿系統(tǒng)病原體,并分離原代培養(yǎng)中的混合細菌。它簡化尿液微生物培養(yǎng)步驟,減少技術人員的工作量能夠顯著的提高鑒定效率以及降低成本。

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